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血液基因组DNA大量提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)(N1123-N1124)

促销: 985.00~4385.00
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N1123(10次) N1124(50次)

血液基因组DNA大量提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)

产品组分

 

货号

N1123

10次)

N1124

50次)

红细胞裂解液RS

200 ml

500 ml×2

消化缓冲液DS

75 ml

400 ml

裂解液MS

100 ml

500 ml

蛋白酶K

5 ml

25 ml

去蛋白液PS

150 ml

400 ml×2

漂洗液PE

75 ml

100 ml×4

纯化液TE

20 ml

100 ml

DNA纯化柱

 10

 50

说明书

1

1

 

裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*,细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗凝剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。一次可从5-10 ml全血中提取到30-200 μg高纯度基因组DNAOD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA,要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA,建议选择Quick血液基因组DNA提取试剂盒(东盛货号:N1131N1132)。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K室温运输,于-20保存,避免反复冻融。

其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即75 ml漂洗液PE加入225 ml无水乙醇,100 ml漂洗液PE加入300 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55℃加热溶解,待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。
柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃-80℃

所有离心步骤均为室温下进行。

请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

取血液样本,每5-10 ml血液加入到一只50 ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。涡旋振荡或上下来回颠倒混匀,室温放置15min 5,000 rpm离心3min,弃上清,收集白色或淡红色沉淀,重复上述步骤,注意不能把沉淀倒掉。

如沉淀仍然呈深红色,表明红细胞裂解不充分,可再加等体积红细胞裂解液RS处理一次。

   对于哺乳动物全血,每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超过500 μl/离心管。每500 μl全血中可提取1000 μg的基因组DNA

加入5 ml消化缓冲液DS,涡旋振荡至形成完全均一的悬浮液。

    如需去除RNA,可加入100 μl RNase A100 mg/mlN9042),振荡15秒,室温放置5min

加入500 μl蛋白酶K5.5 ml裂解液MS,涡旋振荡混匀,65℃温浴15min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

   加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。       

加入5.5 ml无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中,12,000rpm离心1min,弃滤液。

若溶液体积大于DNA纯化柱的容积(700 µl),可分两次离心

此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

加入10 ml去蛋白液PS12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量的基因组DNA

6  加入10 ml漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

加入10 ml漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

    此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

将纯化柱置于新的50ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加600-1000 μl洗脱液TE,室温放置2min

10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA-20℃保存。

   洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视DNA含量多少、用户对DNA浓度要求而定。

对洗脱液TE 65℃预热,会提高基因组DNA的产量。



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