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细胞/细菌总RNA提取试剂盒(R1061)

价格: 650.00
运费 ¥0.00
R1061(50次)

细胞/细菌总RNA提取试剂盒

产品组分

货号

R106150次)

溶液RD

30 ml

溶液RB

50 ml

溶液RP

30 ml

溶液RW

12 ml

TE

1 ml×2

DEPC处理水

10 ml

溶菌酶(50 mg/ml

500 μl

RNase-free 纯化柱

50

RNase-free 离心管

50

说明书

1

需要自备的溶液

  β-巯基乙醇

  无水乙醇

 

产品说明

细胞/细菌总RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,通过在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,彻底去除各种蛋白质和其他杂质,从而使得到的RNA纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种培养细胞或菌体中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同的样品,一个小时内即可完成反应。提取的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于Real-time RT-PCRNorthern BlotDot BlotpolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等。

 

保存条件

溶菌酶和DEPC处理水-20℃保存,溶液RD、溶液RB和溶液RP 4℃保存,其他溶液和纯化柱室温保存。

 

注意事项

  操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%,如1 ml溶液RD中加入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的溶液RD 4℃可放置一个月,溶液RD在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

  第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇,加入量为溶液RW:无水乙醇=14,即每12 ml溶液RW需要加入48 ml无水乙醇。

  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-freeDNase处理样品。

  请严格遵照操作步骤进行操作。

  不同起始材料用量及预期RNA产率。

细胞种类

细胞最大用量

最大用量时RNA得率

COS

3×106

35 μg

Hela

7×106

15 μg

NIH/3T3

1×107

10 μg


操作步骤

操作前在溶液RD中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%

第一次使用前应在溶液RW中加入无水乙醇,加入量请参考瓶上标签。

1.  收集细胞/菌体

悬浮细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):估计细胞数量,300×g离心5 min,将细胞收集到离心管中,仔细吸除所有培养基上清。

单层贴壁细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):可直接在培养容器中裂解(容器直径不超过10 cm),或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。

菌体的收集(收集菌体数最大不超过1×109):4℃ 12,000 rpm离心2 min收集菌体,仔细去除所有培养基上清,用含有溶菌酶的100 μl TE彻底重悬菌体,孵育时间见下表。

细菌种类

TE缓冲液中溶菌酶的浓度

孵育时间(室温)

G-细菌

400 μg/ml

3-5 min

G+细菌

3 mg/ml

5-10 min

以下的所有离心步骤均在室温(20-25℃)进行。

2.  加入350 μl溶液RD(在使用前请加入β-巯基乙醇),涡旋振荡混匀,若出现不溶性沉淀,12000 rpm离心2 min,将上清转移至另一离心管中。

3.  加入700 μl溶液RB,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入纯化柱(纯化柱+收集管)中,12,000 rpm离心30-60 s,倒掉废液,将纯化柱放回收集管中。

4.  向纯化柱中加入350 μl溶液RP12,000 rpm离心30-60 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

5.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW(使用前请先检查是否已按1:4加入无水乙醇,即含80%乙醇),室温静置2 min12,000 rpm离心30 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

6.  重复上步操作。

7.  将纯化柱放回收集管中,12,000 rpm继续空离2 min,去除残余液体,将纯化柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

 此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。

8.  将纯化柱转入一个新的1.5 ml离心管(RNase-free)中,加30–100 μl RNase-free ddH2ODEPC处理水),室温放置2 min12,000 rpm离心2 min

 洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

 如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。



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