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血液基因组DNA提取试剂盒(N1121-N1122)

促销: 572.00~1021.00

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N1121(50次) N1122(100次)

血液基因组DNA提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)

      产品组分

货号

N1121

50次)

N1122

100次)

红细胞裂解液RS

80 ml

80 ml×2

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

50

100

说明书

1

1

 

裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

 

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*,裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内

的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA

本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗凝剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。一次可从0.4 ml全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNAOD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA,要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA,建议选择Quick血液基因组DNA提取试剂盒(东盛货号:N1131N1132)。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K20 mg/ml室温运输,于-20保存,避免反复冻融。

其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和裂解液MS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。


注意事项-----------------------------------------------------------------------------------------------------------

漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55℃加热溶解,待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃-80℃

所有离心步骤均为室温下进行。

请严格按照操作步骤操作。

操作步骤----------------------------------------------------------------------------------------------------------

取血液样本,每400 μl血液加入到一只1.5 ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。涡旋振荡混匀,室温放置15 min5,000 rpm离心3 min,弃上清,收集白色或淡红色沉淀,注意不能把沉淀倒掉。

如沉淀仍然呈深红色,表明红细胞裂解不充分,可再加500 μl红细胞裂解液RS处理一次。

对于哺乳动物全血,每400 μl全血中可提取3-10 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超过20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA

加入200 μl消化缓冲液DS,涡旋振荡至形成完全均一的悬浮液。

如需去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/mlN9042),振荡15秒,室温放置5 min

加入20 μl蛋白酶K220 μl裂解液MS,涡旋振荡混匀,65℃温浴15 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5 min使溶液冷却。

加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。       

加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠,将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1 min,弃滤液。

此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

加入500 μl去蛋白液PS12,000 rpm离心1 min,弃滤液。

此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量的基因组DNA

6  加入500μl漂洗液PE12,000 rpm离心1 min,弃滤液。

漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

加入500 μl漂洗液PE12,000 rpm离心1 min,弃滤液。

8  12,000 rpm离心3 min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2 min

10  12,000 rpm离心2 min,管底即为高纯度基因组DNA-20℃保存。

洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视DNA含量多少、用户对DNA浓度要求而定。

对洗脱液TE 65℃预热,会提高基因组DNA的产量。


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